CFSE Protokolle
CFSE oder Carboxyfluorescein-Succinimidyl-Ester, ist eine fluoreszierende Zelle Farblösung in Lymphozyten Migrationsforschung verwendet. Lymphozyten sind die das Blut-Leukozyten, die die Fähigkeit haben, verlassen die Blutbahn, außerirdische Mikroorganismen, spielt eine wichtige Rolle in der immunen Verteidigung zu erfassen. CFSE kann auch verwendet werden, bezeichnen Thymozyten und embryonalen Zellen, laut "Immunologie und Zellbiologie."
Menschliche Lymphocite befleckend Protokoll
Techniker bereiten die Zellsuspension mit 20 Millionen Zellen pro ml 0,1 % Rinderfötenserum (FBS) und phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS). Sie fügen CFSE und Aufhängung für acht Minuten sitzen lassen, laut The University of Kansas Medical Center. Vorab beheizter FBS wird dann hinzugefügt und die Zellen sind in ein Wasserbad von 98,6 Grad Celsius für 10 Minuten inkubiert. Zellen sind dann fünf Minuten lang zentrifugiert, überstand verworfen wird und die Zellen, in einer Lösung von 2 Prozent gewaschen werden FBS/PBS dreimal. Zellen werden mit Paraformaldehyd befestigt.
Vereinfachte CFSE Färbung Protokoll
Techniker Zentrifugieren Blutproben, Beseitigung der Erythrozyten. Später, waschen sie die Lymphozyten mit PBS, freie Protein zu entfernen. Um Zellteilung nach zwei Tagen beobachten zu können, wird die CFSE in geringen Konzentrationen für acht Minuten hinzugefügt und dann die Reaktion mit fetalen Kalb Serum blockiert ist. Zellen werden zweimal mit PBS gewaschen / FCS. Dieses Protokoll kann laut The Hedrick-Lab an der University of California "in vivo" oder "in vitro" Experimente verwendet werden.
Protokoll für die Aktivierung der Naive CD8-T-Zellen in Vitro
Eine naive T-Zelle ist ein Lymphozyten, die im Knochenmark unterschieden hat. Dieser Zellentyp gilt als ausgereift und Zellen reagieren auf neue Krankheitserreger, die das Immunsystem noch nie aufgetreten. Techniker Influenza-Virus und Zelle Proben auf Eis für 30 Minuten inkubieren, Zentrifugieren und fahren den Inkubationsprozess 18 Stunden bei 98,6 Grad Fahrenheit. Später sind Zellen mit CFSE befleckt und Ergebnisse werden unter Durchflusszytometrie analysiert.