FITC Konjugation Protokolle

December 23

FITC Konjugation Protokolle

Fluoreszein-Isothiocyanat, gemeinhin als FITC--ausgesprochen "Passform-c", mit "ditsy"--Reim ist ein fluoreszierenden Marker, die chemisch gebunden oder Konjugation, mit anderen Molekülen wie Proteinen und Antikörpern. Ein Antikörper konjugiert mit FITC könnte auch als ein "FITC-markierten Antikörper." bezeichnet werden FITC ist begeistert vom Licht bei einer Wellenlänge von 488 nm und gibt aus fluoreszierender Energie erkannt um 530 nm. Ein Wissenschaftler kann mit einem Fluoreszenz-Mikroskop zu sehen oder mit Ausrüstung, die erkennt die fluoreszierenden Emissionen und speichert sie.

Methoden

FITC Konjugation folgt ein Basis-Protokoll. Z. B. würde FITC einen Antikörper werden in einem bestimmten Verhältnis in einem Reagenzglas miteinander vermischt und bei Zimmertemperatur eine Stunde lang gedreht. Um die ungebundenen FITC aus der Lösung zu entfernen, ist es auf eine Affinität Chromatographie Spalte--ein Glasröhrchen gefüllt mit einem Perlen-wie Gel, die das unkonjugierte FITC binden wird gegossen. Inzwischen ist der FITC-markierten Antikörper wird durch die Säule fließen und wird gesammelt für den Einsatz.

Überlegungen zur

Vor Beginn einer Konjugation, sollten der Forscher mehrere Punkte. Erstens, FITC ist sehr instabil und sollte nicht ans Licht--sollte zu allen Zeiten in Folie abgedeckt Röhren gehalten werden. Zweitens müssen die Konjugation Zeit und Temperatur für ein Protein temperaturempfindliche geändert werden. Schließlich können verschiedene Proteine und Antikörper verschiedene FITC-Bindung Kapazitäten haben, so finden das richtige Verhältnis der Antikörper, FITC entscheidend ist; zu wenig FITC macht ein Antikörper nicht nachweisbar und zu viel kann seine Besonderheit zu verändern. Aus diesem Grund sollten vorläufige kleine Konjugationen auf verschiedene Verhältnisse der FITC an Antikörper parallel eingerichtet werden. Sobald das optimale Verhältnis hergestellt ist, kann die groß angelegte Konjugation durchgeführt werden.

Verwendet

Ärzte und Wissenschaftler verwenden FITC-markierten Antikörper, Hormone und Wachstumsfaktoren in einer Vielzahl von Proben und Anwendungen. Zum Beispiel hat eine Stammzelle gefunden im Blut ein Molekül auf seiner Oberfläche namens CD34. Ein Labor-Techniker kann Mischen Blut des Patienten mit einem spezifischen FITC-markierten Antikörper für CD34 und führen die Zellen durch einen Fluss Cytometer, das einen Laserstrahl verwendet, um die FITC fluoreszieren machen. Als nächstes die Cytometer trennt die fluoreszierenden CD34-Zellen vom Rest der Blutkörperchen und Ärzte können diese isolierten Stammzellen für therapeutische Behandlungen.